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    網站首頁技術支持 ◇ 帶你了解反相色譜柱的活化步驟和優化條件
    帶你了解反相色譜柱的活化步驟和優化條件
  • 發布日期:2022-07-26      信息來源:本站      瀏覽次數:101
    •    反相色譜柱具有硅膠和聚苯乙烯色譜柱二者的優點,并且摒棄了這兩種色譜柱的缺點。以乙烯醇共聚物為基質的色譜柱,即使其載炭量很高也能保持表面的濕潤。多孔結構具有足夠大的平均孔徑,對小分子化合物、多肽和小分子蛋白能夠產生理想的分離效果。在有機溶劑比例較高的流動相中,該柱具有與硅膠基質色譜柱相同的柱效,但在堿性緩沖溶液為流動相條件下,其分離效率則超過硅膠色譜柱。顯著的特點之一是基質被烷基化的填料的洗脫順序,其保留能力與碳鏈長度成正比。

       
        反相色譜柱的活化步驟:
        1、應先使用20倍柱體積的甲醇或乙腈沖洗色譜柱;
       
        2、若流動相含有緩沖鹽,用跟流動相中鹽相等比例的超純水和有機相沖洗過渡。用量為20倍柱體積,再用含緩沖鹽的流動相平衡色譜柱,用量為20倍柱體積或以上;
       
        3、若流動相不含緩沖鹽,用流動相平衡色譜柱,用量為20倍柱體積或以上;
       
        4、到壓力基線平穩,若不平穩可延長平衡時間。
       

      反相色譜柱

       

        優化反相色譜柱的條件:
        在確定了色譜柱規格、合適的固定相柱填料、流動相溶劑和改性劑后,即可開始優化方法。方法的優化是根據目標決定的。如果要開發質量控制方法,您可能會需要像等度分離這種可變因素較少的方法。如果目標是得到較高分離度,節省分析時間并不是首要問題,可以選擇長柱使所有組分都得到較大分離度。如果分離速度很重要,則應使用短柱和高流速。對于含許多保留不同的目標化合物的復雜樣品,用等度分離可能不能解決問題,應開發并優化梯度方法。
       
        按約定俗成將水相溶劑和反相色譜中較弱的溶劑稱為流動相“A”,“B”溶劑是有相組成較高和較強的溶劑。在反相色譜模式中,當增加B的百分比時,通常保留將減少。請注意,在還沒有開發出樣品的實際分析方法前,大部分人開發HPLC方法都是采用“反復實驗”的方法,即,嘗試各種不同流動相條件,以找出較佳條件。

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